1.紫外-可见光谱鉴别法多数有机药物分子中含有能吸收紫外可见光的基团,从而显示特征吸收光谱,这是紫外-可见光谱鉴别法的依据。鉴别时一般采用对比法,按规定的方法配制供试品溶液与对照品溶液,通过对比吸收光谱的特征数据、吸收度或吸收系数、吸收光谱的一致性等进行鉴别。由于紫外-可见吸收光谱比较简单,光谱的曲线形状变化不大,专属性不如红外光谱,同一物质图谱相同,但图谱相同的却不一定为同一物质。但由于紫外-可见分光光度法比较方便,所以制剂的鉴别一般不采用红外分光光度法,而采用紫外-可见分光光度法。紫外-可见分光光度法应用时,主要有以下几种方式。(1)规定波长处最大或最小吸收,一般是特征吸收波长位置(λmax或λmin)。如盐酸伪麻黄碱鉴别项下要求“取本品,加水制成每1mL中含0.5mg的溶液,照紫外-可见分光光度法测定,在251nm、267nm与263nm的波长处有最大吸收”。如芬布芬鉴别项下要求“取本品,加无水乙醇制成每1mL中约含5μg的溶液,照紫外-可见分光光度法测定,在281nm的波长处有最大吸收,在238nm的波长处有最小吸收”。(2)测定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸光度。如棕榈氯霉素鉴别项下要求“取本品,加无水乙醇溶解并定量稀释制成每1mL中含20μg的溶液,照紫外-可见分光光度法测定,在271nm波长处有最大吸收,其吸光度约为0.35”。(3)吸收系数法:测定吸收波长,计算吸收系数。如氢化可的松性状项下要求“取本品,精密称定,加无水乙醇溶解并定量稀释制成每1m.中约含10μg的溶液,照紫外-可见分光光度法,在242mm的波长处测定吸光度,吸收系数为422～448”。(4)吸光度比值法:测定不同波长处的吸光度,比值在一定范围内。可以是吸收峰与吸收峰的比值,也可以是吸收峰与吸收谷的比值。如丙酸倍氯米松鉴别项下要求“取本品,精密称定,加乙醇溶解并定量稀释制成每1mL中约含20μg的溶液,照紫外-可见分光光度法测定,在239nm的波长处有最大吸收,吸光度为0.57～0.60;在239nm与263nm的波长处的吸光度比值应为2.25～2.45”。(5)样品经化学处理后,测定反应生成物的吸收光谱特性。以上方法可以单个应用,为了提高鉴别的专属性,也可以几种方法结合起来使用,如丙酸倍氯米松的鉴别。2.红外光谱鉴别法红外光谱鉴别法是一种专属性很强、应用广泛的方法,主要用于组分单一、结构明确的原料药,特别是结构复杂、用其他常用方法不易区分的药物,并且适用于固体、液体甚至是气体的样品鉴别。应用红外光谱进行鉴别试验时,药典采用标准图谱对照法。在药典规定的条件下测定供试品的图谱,然后与国家药典委员会编订的《药品红外光谱集》对照。《药品红外光谱集》分卷出版,分别为第一卷(1995年出版)、第二卷(2000年出版)、第三卷(2005年出版)、第四卷(2010年出版)。每次新版中收载的药品红外光谱图包括新增品种和老品种重新绘制的图谱。所以,如果同一化合物的图谱在不同卷上均有收载时,用于鉴别时以后卷图谱作为比对依据,前卷光谱图仅作为参考。光谱图中的横坐标为波数(cm-1),纵坐标为透光率(T%)分辨率为2cm-1,基线一般控制在90%透光率以上,供试品取量一般控制在使其最强吸收峰在10%透光率以下。原料药的鉴别除另有规定外,应按照《药品红外光谱集》各卷收载的各光谱图所规定方法制备样品。常用的制备方法有压片法、糊法、膜法、溶液法、衰减全反射法和气体法等。组成相对稳定的多组分原料药鉴别不能采用全光谱比对,需参照原料药的标准光谱,在指纹区内选择主要成分的若干个特征谱带作为鉴别的依据。制剂鉴别应按品种鉴别项下规定的前处理方法处理,通常是采用溶剂提取法。提取时应选择适宜的溶剂,尽可能减小辅料对鉴别结果的干扰,并且避免导致提取过程中药物晶型的转变。提取后的样品经适当干燥后依法进行鉴别。在比对光谱时应注意以下儿点。(1)辅料无干扰,待测成分的晶型不变化时,可直接与原料药的标准光谱进行比对。(2)辅料无干扰,而待测成分的晶型有变化时,可用对照品经同法处理后的光谱比对。(3)待测成分的晶型不变化,而辅料存在不同程度的干扰时,可参照原料药的标准光谱,在指纹区内选择3~5个不受辅料干扰的待测成分的特征谱带作为鉴别的依据。鉴别时,实测谱带的波数误差应小于规定值的0.5%。(4)待测成分的晶型有变化,辅料也存在干扰,此种情况一般不宜采用红外光谱鉴别。对照时一般先看最强峰的吸收位置、形状、数目等是否一致,然后再检查中等强度峰和弱吸收峰是否对应,如果供试品的红外光吸收图谱与对照品的图谱完全一致,一般可认为是同一种化合物(只有少数例外,如有些光学异构体或大分子同系物等)。若两光谱图不同,则可判定两化合物不同。但是在实际操作中由于绘制图谱时受药物粉末细度、吸水程度、试样的处理和制备等多种外界条件的影响较大,图谱易发生变异,因此在图谱对照时,要充分考虑各种因素可能造成的影响。药典一般不单独用本法进行鉴别,常与其他理化方法联合进行鉴别。如硫酸阿托品鉴别项下规定:①本品(试样制备:KBr压片法)的红外光吸收图谱应与对照的图谱(《药品红外光谱集》一致;②本品显托烷生物碱类的鉴别反应;③本品的水溶液显硫酸盐的鉴别反应。

透射电镜样品的制备方法很多。其中滴液法，或在滴液法基础上发展出来的其他类似方法如直接贴印法、喷雾法等主要被用于观察病毒粒子细菌的形态及生物大分子等。由于生物样品散射电子的能力很低，所以通常还须采用重金属盐染色或金属喷镀等方法来增加样品的反差，提高观察效果。负染色法由于操作简单，目前在进行透射电镜生物样品制片时比较常用。本实验将主要介绍采用滴液法结合负染色技术观察细菌的形态。实验方法原理由于生物样品主要由碳、氢、氧、氮等元素组成，散射电子的能力很低，在电镜下反差小。所以在进行电镜的生物样品制备时通常还须采用重金属盐染色或金属喷镀等方法来增加样品的反差，提高观察效果。负染色法就是用电子密度高，本身不显示结构且与样品几乎不反应的物质（如磷钨酸钠或磷钨酸钾）来对样品进行「染色」，由于这些重金属盐不被样品成分所吸附而是沉积到样品四周，如果样品具有表面结构，这种物质还能穿透进表面上凹陷的部分，因面在样品四周有染液沉积的地方，散射电于的能力强，表现为暗区，而在有样品的地方散射电子的能力弱，表现为亮区。这样便能把样品的外形与表面结构清楚地衬托出来。负染色法由于操作简单，目前在进行透射电镜生物样品制片时比较常用。实验材料细菌斜面试剂、试剂盒2％的磷钨酸钠水溶液仪器、耗材无菌毛细吸管无菌滤纸实验步骤1.将适量无菌水加入生长良好的细菌斜面内，用吸管轻轻拨动菌体制成菌悬液参用无菌滤纸过滤，并调整滤液中的细胞浓度为108～109 个/毫升。2.取等量的上述菌悬液与等量的2％的磷钨酸钠水溶液混合，制成混合菌悬液。3.用无菌毛细吸管吸取混合菌悬液滴在铜网膜上。4.经3～5min后，用滤纸吸去余水，待样品干燥后，置低倍光学显微镜下检查，挑选膜完整、菌体分布均匀的铜网。有时为了保持菌体的原有形状，常用戊二醛、甲醛、锇酸蒸气等试剂小心固定后再进行染色。

一、透射电子显微镜TEM透射电子显微镜是电子显微镜的原始类型，它的主要原理是将高压电子束引导至样品以照亮样品并产生样品的放大图像。由于透射电镜具有原位观察、高分辨显像等功能，适宜观察光学显微镜观察不到的细微结构。比如：细胞、组织分析、晶体结构等。透射电镜显微成像原理是：通过钨丝电极的阴极发射电子束，再用阳极加速电子束，当电子束穿过标本时，它会发生散射，并提供标本微观结构的图像，可以通过显微镜的物镜观察到。其中的静电和电磁透镜均有助于电子束的聚焦。可以通过将图像投影到荧光硫化锌涂层屏幕上来检查空间变化。可用于记录图像的另一种方法是将照相胶片放入电子束中，电子束将记录图像。也可以使用数码相机在计算机屏幕上实时显示图像。球面像差传统上限制了透射电子显微镜的分辨率。然而，近些年来的技术改进，可以通过球面像差的硬件校正来提高分辨率。因此，现在可以生成分辨率低于0.5埃、放大倍率超过5000万倍的图像。透射显微镜适宜的样品厚度，通常小于100nm。因此，大多数生物标本需要经过化学固定和脱水，才能嵌入聚合物树脂中，以方便TEM的观察。二、扫描电子显微镜SEM扫描电镜的应用较为普遍，扫描电子显微镜原理是：通过光栅扫描技术来产生标本的放大图像。它引导聚焦的电子束穿过样品的矩形区域，当电子束通过时会产生能量损失。该能量会被转换成热、光、二次电子等能量同时反向散射电子。此时通过软件系统进行翻译转换后得到清晰的标本图像信息。从成像原理分析，扫描电子显微镜的分辨率会比透射电子显微镜的分辨率稍差。但它的优势在于可以利用表面处理，创建大样本的图像，尺寸可达几厘米，并且具有较大的景深。因此，来自SEM的图像可以较好地表达样品的真实形状。此外，一种称为环境扫描电子显微镜(ESEM)的特定类型的SEM能够对潮湿或包含在气体中的样品进行成像。这增加了显微镜可以使用的可使用范围。三、反射电子显微镜REM反射电子显微镜涉及检测从被检查的样品反射的弹性散射电子束。反射高能电子衍射(RHEED)和反射高能损失光谱(RHELS)技术通常用于此类显微镜。由于电子显微镜的原理及用途也各不相同，所以应用领域也不同。比如：TEM透射电镜广泛应用于科研实验室主要用于来研究细菌、组织切片和其他微生物。另外，SEM还经常用于材料科学研究的测试和故障分析，检查高温下的超导体、合金强度和纳米管，最终影响电子产品对航空航天业的影响。扫描电子显微镜还常用于法医调查。比如：通过SEM所提供的放大倍数，来分析证据类型的来源，从而得出与法律目的相关的调查结论。

将待测细胞染色后制成单细胞悬液。用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样，鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。　　流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过A／D转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理，将分析结果显示在计算机屏幕上，液可以打印出来，还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。单参数数据以直方图的形式表达，其X轴为测量强度，Y轴为细胞数目。一般来说，流式细胞仪坐标轴的分辨率有512或1024通道数，这视其模数转换器的分辨率而定。对于双参数或多参数数据，既可以单独显示每个参数的直方图，也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。

1、什么是活体电穿孔活体电穿孔法(invivoelectroporation)是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用,并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单,在直流电场作用的瞬间,细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～115μm,这种通道能维持几毫秒到几秒,然后自行恢复。在此期间生物大分子如DNA可通过这种微小的通道进入细胞。近年来活体电穿孔法用于转基因研究的报道不断增多,在基因治疗方面的优势也日趋显著,是一种很好的活体基因导入方法。活体电穿孔法可用于检测瞬时表达系统中载体的表达状况。大量的研究表明活体电穿孔法在基因治疗方面有非常好的应用前景。因此目前国内外对活体电穿孔法介导外源基因转移的研究越来越多。2、活体电穿孔的法的特点活体电穿孔法基因导入和表达效率较高,它的特点主要在以下几个方面:首先,靶器官的选择面广,理论上任何组织和器官都可以作为活体电穿孔的靶器官。在用于基因治疗方面，要考虑到靶器官组织生理特性。如果所选择的局部组织细胞不能把所转移基因的表达产物分泌到外周血液循环中,则在某种意义上说已失去了基因导入的价值,这在基因治疗中是关键性的问题。当使用组织特异性表达载体时,研究人员应根据所构建的表达载体来选择基因转移和表达的靶器官组织。例如鱼精蛋白21启动子可指导外源基因在精母细胞中特异性表达,以小鼠的睾丸作为靶器官将含有鱼精蛋白21启动子的表达载体导入,获得外源基因的表达量远远高于该基因在肝脏和骨骼肌中的表达。其次,对导入的外源基因片段的大小没有限制,从几KB或十几KB的表达载体,到100～200KB的YAC、BAC基因组,都有成功导入并获得表达的报道。此外活体电穿孔法操作简单快速,电穿孔的时间只有几秒钟,而且DNA片段不需要特殊的纯化操作。但电穿孔法也存在一些的缺点:首先,外源基因表达持续的时间很短,虽然外源基因导入后最快可在215小时有表达,但大多1～2月后表达量降至很低。外源基因表达的时间主要由于所构建的表达载体和基因导入的靶细胞组织器官不同而存巨大差异。由于应用不同的表达载体,Muramatsu在小鼠肝脏进行电穿孔7天后则检测不到外源基因的表达,而Heller21天后还可以检测到外源基因的表达。如果选择代谢和酶活动旺盛的组织器官如肝脏,则表达持续时间会较短,表达时间在1个月以内,但以骨骼肌为靶组织,表达可持续15个月。3、活体电穿孔法与其他活体基因导入方法的比较到目前为止,非病毒载体的活体基因导入方法有直接注射法、脂质体法、基因枪法、电穿孔法等。每一种方法都有其各自的特殊性,因此很难将这几种方法进行简单的比较。直接注射法：可将外源基因直接注射到靶位点或血管中,但此种方法不适合以肌肉作为靶器官,它的外源基因表达效率极低,仅为电穿孔法的百分之一。脂质体法：活体基因转移法中脂质体法更适宜较大面积组织的基因导入,但无法避免DNA浓度变低,在出血的情况下会使本来不高的DNA浓度更加降低,往往造成基因导入效率低。基因枪法：适合于DNA较易接触到的质地较坚韧的组织如皮肤,而视网膜、胚胎和禽类的胚盘等组织会由于机械刺激和出血造成器质性损伤或发育停滞,因而不能用基因枪法完成。DNA包裹的金属颗粒从基因枪发出到达组织表面大多只几百微米的距离,较深层的组织不易操作,表达效率也较低。Muramatsu报道在材料一致的情况下,电穿孔法的基因导入和表达效率明显高于其它方法,而且电穿孔法适合多种组织的操作[3]。4、活体电穿孔法施加条件的研究波型的选择在电穿孔过程中方波较指数衰减波更能获得较高的基因表达。同时方波只要要求控制电压和时间，十分直观，而指数衰减波需要控制的电压、电容、电阻等参数，这样的条件摸索过程中，方波较指数衰减波更易得到高表达。

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时间：2009年11月8日10:30-11:30地点：华泰宾馆国际会议厅题目：AXON膜片钳技术的进展及应用内容：主要介绍美国AXON公司的传统膜片钳和全自动膜片钳的发展和应用1.传统膜片钳系统的Axopatch200B放大器，Mutichamp700B放大器，Digidata1440A数模转换器，pClamp10记录分析软件的特点及其应用2.全自动膜片钳系统的特点及其应用3.AXON膜片钳放大器系统的售后服务主讲：杨传秀博士主办单位：马普科学仪器有限公司（Axon产品中国唯一代理商）美国MDC（AXON）公司上海办事处

尊敬的老师：您好！我公司将于6月9号在浦东张江高科技园区内举办“MolecularDevices药物筛选的新趋势和新技术讲座”的讲座，今诚挚邀请您参加。讲座内容：1．现代全自动膜片钳技术和离子通道研究Autoephysandionchannelresearchinmoderntime2．FLIPR技术及其在药物筛选中的应用FLIPRSystemOverviewandItsApplicationinDrugDiscovery报告人：XinJiangPhDApplicationScientistSunnyvale,CA94089,UnitedStates上海：时间：2010年6月9号上午9：00-11:00会场：上海中医药科技产业促进中心一楼会议室（新药筛选中心院内）地址：上海市张江高科技园区郭守敬路199号（近牛顿路）北京：时间：2010年6月11号上午9：30-11:30会场：北京外国专家大厦（二层第一会议室）地址：北京朝阳区北四环中路华严北里8号院（健翔桥东）举办单位:MolecularDevices,Inc上海代表处马普科学仪器有限公司(Axon中国唯一授权代理商)Tel：020-87679617Fax：020-87679635E-mail:info@mapusci.comWebsite:Http://www.mapusci.com

.xwzxtabletd:nth-child(3){width:8%;}.xwzxtabletd:nth-child(4){width:17%;}为促进广大Axon膜片钳仪器使用者理解、掌握膜片钳放大器及其软件的使用，马普科学仪器有限公司、美国MolecularDevices（Axon）公司中国办事处定期在国内主办一系列的AXON膜片钳技术培训班，为用户提供一个技术交流的平台。2009年我们联合中科院生物物理所王晋辉教授实验室于今年12月19-20日（周六,日）在北京举办《第二届Axon膜片钳放大器及软件使用培训班》，本期培训班主要是脑片膜片钳的实验技术的交流。欢迎您的参加，限定人数20人。这次培训，我们将免费向AXON用户提供pClamp10中文版（简装版）一、主办单位马普科学仪器有限公司美国MDC（Axon）公司上海办事处中科院生物物理所王晋辉教授实验室二、主讲人：王晋辉教授中科院生物物理所杨传秀博士美国MDC（Axon）公司上海办事处晏妮（工程师）马普科学仪器有限公司三、主要内容时间内容地点主讲人 12月19日(周六)  9:00-10:00Axon膜片钳放大器系统在脑片膜片钳实验中的应用 王晋辉教授10:10-12:00 1.MultiClamp700B膜片钳放大器的使用：MultiClamp700Bcommand软件面板的操作2.Axopatch200B膜片钳放大器的使用：电容及串联电阻的补偿的操作3.Digidata1440A数模转换器的使用 杨传秀博士晏妮12:00--14:00午餐  14:00-17:004.pClamp10软件的使用：（1）Clampex10采集软件：采样参数初始设置；程序（protocol）编制；全细胞记录模式离子通道电流记录常用电压钳制方案介绍等。（2）Clampfit10分析软件：基本数据处理：基线调节、滤波等基本数据分析：离子通道的动力学研究（I-V曲线制作、拟合、作图）等。（3）单通道数据分析：事件检测、电导测定、开放概率计算、开放时间分布。5.AXON膜片钳放大器系统的特点及与其他产品的比较同上 杨传秀博士晏妮 12月20日(周六)  9:00-12:00膜片钳现场操作指导1.脑片的制备2.细胞的封接3.通道电流记录分析演示 杨传秀博士董智渊晏妮杨冀杰12:00--14:00午餐  14:00-17:00问题讨论和交流 杨传秀博士董智渊晏妮杨冀杰四、培训费用本培训班不收取培训费。学员交通、住宿费自理，提供免费中餐。五、联系方式马普科学仪器有限公司联系人：王玉梅Tel:010-62267127Fax:010-62269137E-mail:info@mapusci.comWebsite:Http://www.mapusci.com

.xwzxtabletd:nth-child(3){width:8%;}.xwzxtabletd:nth-child(4){width:15%;}为促进广大Axon膜片钳仪器使用者理解、掌握膜片钳放大器及其软件的使用，马普科学仪器有限公司、美国MolecularDevices（Axon）公司中国办事处定期在国内主办一系列的AXON膜片钳技术培训班，为用户提供一个技术交流的平台。2009年我们联合南方医科大学生理学教研室于今年月11－12日在广州举办Axon膜片钳放大器及软件使用培训班，欢迎您参加，限定人数20人。一、主办单位马普科学仪器有限公司美国MDC（Axon）公司上海办事处南方医科大学生理学教研室二、主讲人：肖中举教授南方医科大学生理教研室杨传秀博士美国MDC（Axon）公司上海办事处董智渊（工程师）马普科学仪器有限公司杨冀杰（工程师）马普科学仪器有限公司晏妮（工程师）马普科学仪器有限公司三、主要内容时间内容地点主讲人 11月11日  9:00-10:00Axon膜片钳放大器系统在脑片膜片钳实验中的应用 肖中举教授10:10-12:00 1.MultiClamp700B膜片钳放大器的使用：MultiClamp700Bcommand软件面板的操作2.Axopatch200B膜片钳放大器的使用：电容及串联电阻的补偿的操作3.Digidata1440A数模转换器的使用 杨传秀董智渊晏妮12:00--14:00午餐  14:00-17：004.pClamp10软件的使用：（1）Clampex10采集软件：采样参数初始设置；程序（protocol）编制；全细胞记录模式离子通道电流记录常用电压钳制方案介绍等。（2）Clampfit10分析软件：基本数据处理：基线调节、滤波等基本数据分析：离子通道的动力学研究（I-V曲线制作、拟合、作图）等。（3）单通道数据分析：事件检测、电导测定、开放概率计算、开放时间分布。5.AXON膜片钳放大器系统的特点及与其他产品的比较同上 杨传秀董智渊晏妮 11月12日  9:00-12：00膜片钳现场操作指导1.脑片的制备2.细胞的封接3.通道电流记录分析演示 杨传秀董智渊晏妮杨冀杰12:00--14:00午餐  14:00-17：00问题讨论和交流 杨传秀董智渊晏妮杨冀杰四、培训费用本培训班不收取培训费。学员交通、住宿费自理，提供免费中餐。五、交通路线地址：广州市广州大道北1838号南方医科大学乘车路线：广州火车站乘201至南方医科大学站广州火车东站总站乘808、884至南方医科大学六、住宿安排广州南方大酒店广州市广州大道北1838号南方医科大学内酒店预订部电话：020-84206966.84179950七、联系方式马普科学仪器有限公司联系人：邓建丽Tel:020-87678617Fax:020-87679631E-mail:info@mapusci.comWebsite:Http://www.mapusci.com